RT-PCR技術(shù)服務(wù)的核心步驟包括：

RNA提?。簭慕M織或細(xì)胞等樣本中提取RNA，確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。

反轉(zhuǎn)錄（RT）：在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以RNA為模板合成cDNA的第一鏈。這一步驟通常使用隨機(jī)引物、Oligo dT或基因特異性引物中的一種。

PCR擴(kuò)增：以cDNA為模板，在DNA聚合酶的作用下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到目的片段。

RT-PCR技術(shù)服務(wù)的注意事項(xiàng)：

避免RNA酶污染：RNA酶會(huì)降解RNA，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，在操作過程中應(yīng)使用RNA酶抑制劑，并確保所有器皿和試劑無RNA酶污染。

選擇合適的引物：引物的選擇對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體情況選擇合適的引物，如隨機(jī)引物、Oligo dT或基因特異性引物。

控制反應(yīng)條件：不同來源的逆轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)溫度有所不同，應(yīng)根據(jù)所選逆轉(zhuǎn)錄酶的要求設(shè)置合適的反應(yīng)條件。

RT-PCR技術(shù)服務(wù)的應(yīng)用：

基因表達(dá)研究：通過檢測(cè)細(xì)胞中特定基因mRNA的含量，可以評(píng)估該基因的表達(dá)水平。

病毒檢測(cè)：RT-PCR技術(shù)可用于檢測(cè)細(xì)胞中的RNA病毒，如SARS-CoV-2等。

基因克隆：通過RT-PCR技術(shù)可以直接克隆特定基因的cDNA序列，為后續(xù)的基因功能研究提供基礎(chǔ)