薄層掃描儀是可以對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行掃描的分光光度計(jì)，用可見(jiàn)光或紫外光作光源，線(xiàn)性?huà)呙杌蜾忼X掃描薄層板展開(kāi)后的斑點(diǎn)，該斑點(diǎn)就吸收該組分特征波長(zhǎng)的單色光，剩余的單色光經(jīng)透射或反射或發(fā)射熒光，由檢測(cè)器積分起來(lái)，獲得這塊斑點(diǎn)面積的待測(cè)物質(zhì)含量。
原理
薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固—液吸附色譜。它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于少量樣品(幾到幾微克，甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，因此，又可用來(lái)精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來(lái)跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示，又稱(chēng)薄層層析，屬于固-液吸附色譜。是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種微量、快速而簡(jiǎn)單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克，甚至0.01μg)的分離;另一方面若在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚，將樣品點(diǎn)成一條線(xiàn)，則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來(lái)精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí)，常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來(lái)判斷反應(yīng)是否完成。
薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線(xiàn)上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開(kāi)劑的展開(kāi)槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開(kāi)劑前沿離頂端約1cm附近時(shí)，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。
薄層色譜儀包括：薄層層板點(diǎn)樣器、手動(dòng)涂布臺(tái)、干燥儲(chǔ)備箱、洗板架、紫外光探測(cè)器。可以快速分離脂肪酸、類(lèi)固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)。
類(lèi)別
1.離心薄層色譜儀 2.棒狀薄層色譜儀 3.手動(dòng)薄層色譜儀 4.雙波長(zhǎng)薄層色譜掃描儀 5.全自動(dòng)薄層色譜儀 6.旋轉(zhuǎn)薄層色譜儀 7.全波長(zhǎng)薄層色譜儀 8.型薄層色譜儀 9.二極管陣列薄層色譜掃描儀 10.加壓薄層色譜儀 11.暗箱式薄層色譜攝影儀
用途
適用于化學(xué)、化工、醫(yī)藥、臨床、農(nóng)業(yè)、食品、毒理等領(lǐng)域內(nèi)的各種化合物的分離、精制、定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定。
操作方法
(1) 薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,
去除表面的氣泡后，倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2～
0.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置
有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過(guò)透射光和反射光檢視)。
(2) 點(diǎn)樣 除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底
邊2.0cm，樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為
宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。
(3) 展開(kāi) 展開(kāi)缸如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開(kāi)劑，并在壁
上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封缸頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或
按正文規(guī)定操作。
將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中,浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊0.5
～1.0cm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中),密封缸蓋,待展開(kāi)至規(guī)定距離(一般為10～15cm),
取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。
(4) 如需用薄層掃描儀對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描檢出，或直接在薄層上對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描
定量，則可用薄層掃描法。
薄層掃描的方法，除另有規(guī)定外，可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說(shuō)明，
結(jié)合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果
的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線(xiàn)性的情況下，將供試品與
對(duì)照品在同一塊薄層上展開(kāi)后掃描，進(jìn)行比較并計(jì)算定量，以減少誤差。各種供試品，
只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才能獲得滿(mǎn)意的結(jié)果。
洗脫后測(cè)定法
薄層經(jīng)展開(kāi)后用刮刀或捕集器將斑點(diǎn)的吸附劑捕集后，再用適當(dāng)有機(jī)溶劑洗脫，然后用可見(jiàn)、紫外分光光度法、熒光分光光度法測(cè)定含量。
但樣品斑點(diǎn)不能?chē)婏@色劑，以免影響不測(cè)定，斑點(diǎn)位置的確定方法。
樣品在紫外線(xiàn)下發(fā)射熒光的，可在紫外燈下觀察斑點(diǎn)并用針劃去斑點(diǎn)位置。
用碘蒸汽顯色，在組分處理出棕色斑點(diǎn)(碘吸附后會(huì)揮發(fā))。
用標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)照，將標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)于邊上一測(cè)顯色時(shí)，蓋住樣品，定出斑點(diǎn)位置。
