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定量蛋白質組學

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iTRAQ定量蛋白質組學:iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技術是由美國應用生物系統(tǒng)公司ABI 研發(fā)的一種多肽體外標記技術。該技術采用4種或8種同位素編碼的標簽,通過特異性標記多肽的氨基基團,爾后進行串聯(lián)質譜分析,可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質的相對含量或含量。

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iTRAQ定量蛋白質組學:iTRAQ (isobaric tags for relative and absolute quantitation)技術是由美國應用生物系統(tǒng)公司ABI 研發(fā)的一種多肽體外標記技術。該技術采用4種或8種同位素編碼的標簽,通過特異性標記多肽的氨基基團,爾后進行串聯(lián)質譜分析,可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質的相對含量或含量。

iTRAQ定量蛋白質組學iTRAQ和tmt的技術原理*一樣,所不同的是二者的分子結構有差異。與SILAC相比(標記蛋白質),iTRAQ和TMT是對肽段進行標記的。依據(jù)iTRAQ/TMT標簽的質量數(shù)差異,通過MS實現(xiàn)對多組樣品中的蛋白質進行相對定量:

SILAC是通過一級MS( MSl)對蛋白質進行定量,而iTRAQ/TMT是通過二級MS( MS/MS.MS2)進行定量的iTRAQ/TMT幾乎能兼容所有來源的蛋白質樣品,并且能同時分析多達8-10組的樣品,分析通量高。

iTRAQ定量蛋白質組學

1、分別提取蛋白質并定量;
2、Trypsin分別對蛋白進行酶解,提取肽段;
3、用不同質量數(shù)的iTRAQ/TMT標簽分別對肽段樣品進行標記:
4、標記完成后,混合樣品,用SCX進行組分分離(15-20組分);
5、對每個組分進行LC-MS分析:
6、蛋白質鑒定與定量分析,篩選差異表達的蛋白;
7、生物學實驗驗證(Western blot,EUSA等):

iTRAQ定量蛋白質組學技術優(yōu)勢
1、高通量,能同時進行多達8-10組樣品蛋白質組的定性與定量分析; 
2、幾乎兼容所有來源的樣品(動植物組織、細菌、血液等); 
3、實驗周期短。  

iTRAQ定量蛋白質組學

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