ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)的原理
ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。
進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，樣品中的受檢物質(zhì)（抗原或抗體）與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過(guò)洗板除去非結(jié)合物，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，此時(shí)，能固定下來(lái)的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過(guò)加入與酶反應(yīng)的底物后顯色，根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量，進(jìn)行定性或定量的分析。
由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的靈敏度。
ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)的基本類(lèi)型
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：
1. 固相的抗原或抗體；
2. 酶標(biāo)記的抗原或抗體；
3. 酶作用的底物。
根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法。
1. 雙抗體夾心法測(cè)抗原
針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。
2. 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原
首先將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液，另一組只加酶標(biāo)記抗原，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。此方法測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可，對(duì)小分子抗原如激素和藥物類(lèi)的測(cè)定常用此法。優(yōu)點(diǎn)是快，缺點(diǎn)是需要較多量的酶標(biāo)記抗原。
3. 免疫抑制法測(cè)抗原
被檢標(biāo)本對(duì)底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原的量成正比，二者之差即為預(yù)測(cè)抗原的量。
4. 間接法測(cè)抗體
是檢測(cè)抗體zui常用的方法，原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。
本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。主要用于對(duì)病原體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。
