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5. 操作方法
5.1. 樣品制備：
（1） 固體樣品：如果樣品粒度＞0.5mm，研磨后過(guò)0.3-0.5mm（40-60目）篩。
（2） 高脂肪樣品：如果脂肪含量＞10%，用石油醚去脂。每克樣品用25ml，每次提取完靜置一會(huì)兒再小心將燒杯傾斜，慢慢將石油醚倒出，共洗三次。
（3） 高碳水化合物樣品：如果樣品干重含糖＞50%，用85%乙醇去除糖份，每克樣品每次10ml，共洗三次輕輕倒出，然后在40℃烘箱中不時(shí)翻攪干燥過(guò)夜，并研磨過(guò)0.5mm篩。
5.2. 樣品消化
（1） 準(zhǔn)確稱(chēng)取雙份1.000±0.005g樣品（M1和M2），置于高腳燒杯中。
（2） 在每個(gè)燒杯中加入40ml MES-TRIS緩沖液，在磁力攪拌器上攪拌直到樣品*分散。（防止團(tuán)塊形成，使受試物與酶能充分接觸）。
（3） 用熱穩(wěn)定的*進(jìn)行酶解處理：加100μl熱穩(wěn)定的*溶液，低速攪拌。用鋁箔片將燒杯蓋住，在95-100℃水浴中反應(yīng)30分鐘。（ 起始的水浴溫度應(yīng)達(dá)到95℃）。
（4） 冷卻：所有燒杯從水浴中移出，涼至60℃。打開(kāi)鋁箔蓋，用刮勺將燒杯邊緣的網(wǎng)狀物以及燒杯底部的膠狀物刮離，以使樣品能夠*的酶解。用10ml蒸餾水沖洗燒杯壁和刮勺。
（5） 用蛋白酶進(jìn)行酶解處理：在每個(gè)燒杯中各加入100μl蛋白酶溶液。用鋁箔蓋住，在60℃持續(xù)搖動(dòng)反應(yīng)30分鐘（開(kāi)始時(shí)的水浴溫度應(yīng)達(dá)60℃），使之充分反應(yīng)。
（6） pH值測(cè)定：30分鐘后，打開(kāi)鋁箔蓋，攪拌中加入5ml0.561mol/L HCL至燒杯中。60℃時(shí)用1mol/L NaOH溶液或1mol/L HCL溶液調(diào)zui終pH為4.0-4.7。（注意：當(dāng)溶液為60℃時(shí)檢測(cè)和調(diào)整pH，因?yàn)樵谳^低溫度時(shí)pH會(huì)偏高。）
（7） 用淀粉葡糖苷酶溶液酶解處理：攪拌同時(shí)加100μl淀粉葡糖苷酶溶液。用鋁箔蓋住，在60℃持續(xù)振搖反應(yīng)30分鐘，溫度應(yīng)恒定在60℃。