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　　【中國儀器網(wǎng) 維修保養(yǎng)】液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術，是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質的特點而被廣泛應用于生物化學、藥物及臨床分析。
 

　　而液相色譜zui重要的就是它的色譜柱。液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱，或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱；反相柱填料主要以硅膠為基質，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱，其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
 

　　在日常分離分析工作中，色譜柱的正確使用和維護十分重要，色譜柱使用是否得當，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
 

　　(1)在裝卸、更換色譜柱時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根柱，這樣有助于延長柱子的壽命。避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩。
 

　　(2)經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75mL。色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進人柱內，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。在完成分離分析工作之后，不應立即停機，需及時對色譜分析系統(tǒng)進行沖洗，一般0.5h以上，以除去色譜柱內的雜質。
 

　　(3)因為液相色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，當出現(xiàn)色譜峰高陣低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰時，一般來說可能是柱效下降。反相柱的再生，采用以甲醇:水=95: 5(V/V),純甲醇，二氯甲烷等溶劑作流動相，順次沖洗，每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為2030倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作流動相沖洗色譜柱每步注意平衡溶劑的順序，不要顛倒每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為20-30倍柱體積(因異丙醇的粘度較大，沖洗過程中請隨時注意調整沖洗的流速)，用甲醇沖洗完后，再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴格脫水。離子交換柱的再生。長時間在高pH值和高離子強度緩沖溶液中使用，將導致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗，可使陽離子柱再生;反之，用稀堿緩沖溶液沖洗，可使陰離子柱再生。以上色譜柱的再生方法并不是的標準方法，使用者可根據(jù)自己的實際經(jīng)驗和目的，選擇合適的并能溶解柱內污染物的溶劑作流動相，按正方向或反方向的沖洗。但是需要指出是，無論采用什么方法再生色譜柱，均不可能*隊復柱效或其他參數(shù)至新柱水平。